液相色谱知识

c18色谱柱活化方法

2023-08-11 Vink

C18色谱柱是一种广泛应用于分离和纯化化合物的常见色谱柱。在使用C18色谱柱之前,有时需要对其进行活化,以确保最佳的分离效果和性能。以下是一些常用的C18色谱柱活化方法:


1. 洗脱剂活化法:使用有机溶剂(例如甲醇或乙腈)作为洗脱剂,以高流速(例如1-2 mL/min)通过色谱柱进行洗脱。可以使用纯有机溶剂或者混合有机溶剂/水组成的溶剂体系进行洗脱。通常需要洗脱柱体积的5-10倍才能完全活化柱子。


2. 碱性洗脱剂活化法:使用碱性洗脱剂(如0.1M氢氧化钠或氨水)作为洗脱剂,以适当的流速通过色谱柱进行洗脱。在使用碱性洗脱剂时,需要注意柱的耐受性和避免过长时间的接触,以免对柱造成损害。


3. 酸性洗脱剂活化法:使用酸性洗脱剂(如1%的三氟醋酸或盐酸)作为洗脱剂,以适当的流速通过色谱柱进行洗脱。在使用酸性洗脱剂时,同样需要注意柱的耐受性和避免过长时间的接触。


在活化C18色谱柱之后,通常需要重新平衡柱子,以使其达到稳定状态。重新平衡可以使用初始的流动相条件进行,然后再根据实验的需要进行调整。在进行分析之前,最好进行一系列的均衡运行,以确保柱子表现出稳定的性能。


需要注意的是,每个实验条件和色谱柱可能会有所不同,最佳的活化方法可能因实验需求而异。因此,建议根据具体的实验要求和柱子制造商的推荐,选择适合的活化方法。在活化色谱柱时,应仔细操作,避免超过柱子的最大工作压力并保证柱子的安全使用。