C18色谱柱的分离原理是基于反相色谱技术。在反相色谱中,填料表面是由亲水基团(比如硅胶)修饰而成的,在有机溶剂中具有相对疏水性。而C18色谱柱中的填料表面经过烷基化修饰,使其具有更高的疏水性。在样品溶液中,疏水性化合物的分子与填料表面的疏水区域相互作用较强,因而在色谱柱中停留时间较长;而相对亲水的化合物与疏水区域的相互作用较弱,因此在柱中停留时间较短。因此,当样品溶液通过C18色谱柱时,亲水性化合
2023/08 Vink
C18色谱柱是一种常见的反相色谱柱。C18是指该色谱柱固定相上的化合物是八十八烷基化硅胶。反相色谱主要用于分离和分析极性化合物,通常使用有机溶剂作为流动相,而水作为弱溶剂。C18色谱柱在生化、药物和环境等领域中广泛应用,能够有效分离和测定许多化合物。
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反相柱的固定相极性指的是固定相与溶液中分离物质之间的亲疏关系。在反相柱中,固定相通常选择具有疏水性的材料,如C18,C8等碳链结构。疏水性固定相对亲水性分离物具有较强的吸附作用,因此可以有效地分离非极性物质。相反,对于极性分离物质,反相柱的固定相则表现出一定的亲和性。在此情况下,亲和性固定相能够吸附并与极性分离物质发生相互作用,从而实现分离。总之,反相柱的固定相极性选择取决于待分离化合物的极性特征
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反相柱是通过将固定相填充到柱子中来完成装载的。下面是一般的反相柱装载步骤:1. 准备柱子:选择合适尺寸的柱子,并确保柱子干燥和无污染。2. 准备固定相:根据需要选择合适的反相固定相材料(如C18),并将其加入到一个干燥的容器中。3. 处理固定相:固定相需要经过活化处理,以去除不纯物质和活化剂。这可以通过重复洗涤和干燥来完成。4. 充填柱子:将处理好的固定相填充到柱子中。可以使用柱子填充设备或手工操
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反相柱的极性较大的化合物在柱子中的保留时间相对较短,因此它们通常会先出峰。较大极性的化合物在反相柱上与柱子的非极性固定相相互作用较弱,因此在洗脱过程中很快地被洗脱出来。反相柱的固定相通常是由含有亲油基团(如碳链或苯环)的非极性化合物构成的。在反相柱上,较极性的化合物与非极性固定相之间的作用力较弱,容易从柱子上洗脱下来。与此相对应的是,极性较小的化合物与非极性固定相之间的作用力较强,容易被固定相保留
2023/07 Vink
反相柱的上样量没有规定的固定值,而是根据柱子的尺寸、样品类型、分析目的和仪器要求等因素来确定。一般来说,上样量应该在柱子承受范围内,并且要保持在柱子的线性范围内,以避免过载或损坏柱子。一般情况下,常规分析中的上样量在微克至毫克范围内,对于一般的HPLC柱,上样量通常在1-10微克之间。对于高灵敏度的分析或特定样品的分析,上样量可能会低于1微克。同时,在上样过程中也应考虑样品的溶解度,不要过量上样导
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反相柱和正相柱是两种常见的色谱柱类型,它们在分析样品时有一些重要的区别。1. 原理不同: 反相色谱是基于液体相对于固定相而言具有较强极性的原理,常用的固定相是疏水性的碳链;而正相色谱是基于液相对固相而言具有较弱极性的原理,常用的固定相是亲水性的硅胶或氨基硅胶。2. 选择性不同: 由于反向和正相柱的固定相性质不同,它们对样品的选择性也不同。反相柱通常用于非极性或中等极性的化合物,而正相柱则更适用于极
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